FISH（熒光原位雜交）

熒光原位雜交用于通過(guò)互補探針序列的雜交來(lái)顯示確定的核酸序列。FISH 有很多應用，從基本的基因定位到染色體畸變的診斷（細胞遺傳學(xué)）。多色 FISH 圖像分析需要使用單獨的濾光片激發(fā)塊（立方體）或激發(fā)濾光片轉輪結合多波段二向色鏡和發(fā)射濾光片來(lái)隔離各種信號。

熒光免疫原位雜交（FISH）和 多路復用（Densely Multiplexed）成像的串色

當同時(shí)使用具有多個(gè)密集光譜的熒光染料時(shí)，區分熒光標記的能力決定了檢測結果的速度和準確性。在進(jìn)行熒光免疫原位雜交 （FISH）測量時(shí)，這種密集的圖像復用特別重要。因此，減少串色（即來(lái)自不希望的熒光染料的信號相對于所需熒光染料的信號影 響）至關(guān)重要。下表量化了使用特定的
BrightLine 熒光免疫原位雜交（FISH）濾光片組時(shí)，相鄰熒光染料之間的串擾值。該串擾值 決定于典型的歸一化熒光染料光譜、濾光片的設計光譜和強金屬鹵化物燈光譜的重疊。

這些結果已經(jīng)針對每個(gè)給定的濾光片組進(jìn)行了標準化，因此用戶(hù)應該讀取每行（而不是每列）的值以查看給定濾光片組的預期串擾值。

例如，當使用 SpectrumGold™ 濾光片組對標記有 SpectrumGreen™、SpectrumGold™ 和 SpectrumRed™ 熒光染料的樣品進(jìn)行 成像時(shí)，不需要的 SpectrumGreen 信號將小于所需要的 SpectrumGold 信號的 2%，并且 SpectrumRed 信號將小于1%。

好的濾光片會(huì )帶來(lái)哪些不同 ?

BrightLine“不易燒熔"濾光片在多年的使用中，在研究和臨床領(lǐng)域都得到了廣泛的測試。BrightLine 熒光免疫原位雜交 FISH 濾光片組也進(jìn)行了嚴格的獨立測試。結果顯示：使用 BrightLine 濾光片組進(jìn)行熒光免疫原位雜交 FISH 分析時(shí)，無(wú)論您是查找 和分析中期分裂，還是通過(guò)點(diǎn)計數對細胞進(jìn)行評分，都可以提高分析的速度和準確性。

熒光濾光片簡(jiǎn)介

一個(gè)分子吸收其吸收譜帶波長(cháng)范圍（即吸收光譜）內的光，然后幾乎瞬間發(fā)出較長(cháng)的、位于其發(fā)射譜帶波長(cháng)范圍（即發(fā)射光譜）內的光，此時(shí)，就會(huì )發(fā)生光學(xué)熒光。為了達到分析的目的，強的熒光分子，亦被稱(chēng)為熒光團、熒光染料，專(zhuān)門(mén)用于連接到生物分子或其他感興趣的目標，用于鑒定、定量、甚至實(shí)時(shí)觀(guān)察物質(zhì)的生物和化學(xué)活性。熒光染料因為具有*的靈敏度、高特異性和簡(jiǎn)單性，被廣泛應用于生物技術(shù)和分析檢測中。大多數熒光儀器，包括熒光顯微鏡，都是基于光學(xué)濾光片。

一個(gè)典型的系統有三個(gè)基本的濾光片組成：激發(fā)濾光片（或吸收濾光片），二向色鏡分束鏡（或二向分色鏡）和發(fā)射濾光片（或阻擋濾光片）。激發(fā)濾光片通常是一個(gè)帶通濾光片，它只透過(guò)熒光染料的吸收波長(cháng)，從而最大限度地減少熒光的其他來(lái)源的激發(fā)光和阻擋熒光發(fā)射帶內的激發(fā)光。二向色鏡分束鏡是一種邊緣濾光片，用于斜角入射 （通常是 45 °），以有效地反射激發(fā)波段的光和透射發(fā)射波段的光。Semrock 發(fā)射濾光片通常是一個(gè)帶通濾光片，僅透過(guò)熒光染料的發(fā)射波長(cháng)，并阻擋這個(gè)波段之外的所有不需要的光 - 尤其是激發(fā)光。通過(guò)濾光片阻擋不需要的激發(fā)能量（包括紫外和紅外）或樣品和系統的自發(fā)熒光，就可以得到具有黑暗背景的熒光圖像。

我們可以通過(guò)選擇適當的光學(xué)濾光片，組成一個(gè)濾光片組，用于觀(guān)察熒光或者對熒光進(jìn)行成像，這樣就可以達到使一個(gè)給定的熒光染料可視化的目的。因為不同熒光染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜不同，濾光片組需要優(yōu)化，才可以用于不同熒光染料的同時(shí)成像。在不同的實(shí)驗條件下使用同一個(gè)熒光染料時(shí)，濾光片組也需要優(yōu)化。